咱河南话里,这叫“跑胶跑不出”。你说你做实验做到一半,琼脂糖凝胶电泳跑了半天,marker 都没跑出来,你说你急不急?别着急,我来给你讲讲这是咋回事儿。
你先看看你配的胶是不是有问题。胶的浓度是不是不对?缓冲液的 pH 值是不是不合适?凝胶的温度是不是太高了?这些都可能影响胶的效果,导致 marker 跑不出来。你得按照说明书一步一步来,别乱搞。
还有啊,你看看你电泳的电压是不是太低了?电压不够,marker 就跑不快,甚至跑不出来。你得根据胶的厚度和长度,调整合适的电压,一般是 80-200v 吧。你可别乱调,不然会把胶烧掉的。
你再看看你上样的量是不是太多了?上样量太多,marker 就会被稀释,变得不明显。你得按照说明书上的要求,控制好上样的量,别太多也别太少。你可以用移液器吸取适量的样品,加到凝胶孔里,别贪心哦。
你再想想你的样品是不是太复杂了?样品里有没有太多的杂质?有没有太多的盐离子?这些都会影响 marker 的迁移,导致跑不出来。你得把样品处理一下,比如用苯酚/氯仿抽提,用乙醇沉淀,用蛋白酶 K 消化等等。你得把样品弄得干净一点,不然会影响实验结果的。
你再看看你电泳的时间是不是太短了?时间太短,marker 还没跑够距离,就被凝胶挡住了。你得根据 marker 的大小和胶的厚度,调整合适的电泳时间,一般是 30-60 分钟吧。你别着急,慢慢等,等 marker 跑到合适的位置,你就可以停下来了。